大肠杆菌化学感受态（Stbl3）

大肠杆菌化学感受态（Stbl3）

Stbl3 Chemically Competent Cell
Stbl3感受态细胞

使用前请仔细阅读说明书
目 录 号：M00802

储存条件：-80°C保存六个月。

产品简介
Stbl3菌株来源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。基因组含有重组酶recA13突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有链霉素抗性；不存在lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。

基因型
 F- glnV44 recA13 mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 xyl-5 leu mtl-1

操作步骤
（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1. 取100 μl感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将冰浴融化的感受态细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。
2. 向感受态细胞中加入目的DNA，轻弹混匀，在冰浴中静置30 min。
3. 将离心管置于42C水浴中热激90秒，然后快速将管转移至冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4. 向每个离心管中加入900 μl无菌的SOB或者LB液体培养基（不含抗生素），混匀后置于37°C摇床，200 rpm振荡培养60min，目的是使菌体得到复苏。
5. 根据实验需要（质粒或重组连接产物转化），将离心管内容物混匀，吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，涂布均匀直至液体全部被吸收，倒置平板，37°C培养12-16小时。

注意事项
1. 感受态细胞应保存在-70°C，不可冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行，以免污染杂菌。
3. 加入DNA后用手指轻轻弹匀，避免移液器吹吸。
4. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。
5.  Stbl3细胞生长度快，8-10h可见克隆。
6.  若用氨苄抗生素筛选，应使用10μg/ml ampicillin的平板。