胶原酶

胶原酶 

发布日期：2019-08-26 浏览次数：95

产品规格：100mg

储存方式：4℃避光保存，2年有效。储存液-20℃避光冻存。

产品简介
     胶原酶(collagenase)是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为最终浓度200U/ml(约为1mg/mL)或0.03%~0.3%。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。
1、胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备。用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞，用于哺乳动细胞的分离。
2、胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；
3、胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；
4、胶原酶IV（Type IV Collagenase）：胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
5、胶原酶V（Type V Collagenase）：胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。

使用方法 
1）胶原酶储存液的配制
向每管100mg的胶原酶中加入100µL的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca²⁺、Mg²⁺），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成1g/ml（即1000×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。
使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5mg/ml，用于软骨消化的常用浓度为1-2mg/ml，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。

2）组织的分离
1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm大小的组织块；
2）利用含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS洗涤组织块数次；
3）加入足量的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；
4）于37℃孵育4-18h。消化时使用水平摇床以及用3mM的CaCl₂补充消化可以提高消化效率。
5） 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；
6）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

3） 器官灌注
1）向37℃预热的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS中加入胶原酶，另添加3mM的CaCl₂有助于提高分离效率；
2）按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；
3）将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育；
4）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
5）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
6）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

使用注意事项 
1. 使用本试剂前请仔细阅读说明书并规范无菌操作过程。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套进行操作。
3. 该产品仅用作科研检测，不能用于临床应用及相关操作。