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人脐静脉内皮细胞

人脐静脉内皮细胞

 


一、产品详情:
1.    产品名称:人脐静脉内皮细胞,Human Umbilical Vein Endothelial Cells
2.    组织来源:人脐静脉组织
3.    细胞形态:细胞贴壁生长,呈现铺路石状镶嵌排列,细胞为扁平多角形,辩解清除,包浆丰富
4.    发货形式:新鲜原代细胞或冻存原代细胞
5.    细胞简介:本公司生产的人脐静脉内皮细胞采用胶原酶消化制备而来,细胞总量约为5×105个/瓶,细胞纯度可达90%以上,且不含HIV-1,HBV,HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
6.    注意事项:该细胞只可用于科研。

二、产品手册
产品介绍:
      人脐静脉内皮细胞分离自脐带静脉,一般用于生理学和药理学研究,例如大分子转运、血液凝固、血管发生和纤维蛋白溶解等等。

质量控制:
       本产品经过了真菌/细菌、支原体、内毒素检测。
       本产品还经过细胞复苏活力检测,细胞周期检测,分化潜能鉴定。
       本产品经过光镜检测形态,经Western blot检测蛋白标记物的表达鉴定。
       该产品仅提供给进一步科研使用,不可应用于临床治疗等其他方面。

产品特性:
       在进行血管内皮细胞实验时,通常选用的细胞模型为人脐静脉内皮细胞,而不是直接采用静脉血管内皮细胞或者动脉血管内皮细胞。原因是脐静脉内皮细胞具有干细胞的潜能,理论上可以传代50-60次,且具有血管生成、迁移等特点。

细胞相关操作
        细胞操作都需严格按照无菌操作进行。
收到复苏好的贴壁细胞的处理方法:
1.    先从外包装盒中拿出细胞瓶,在细胞瓶表面喷一层酒精,并小心去掉封口膜;
2.    在显微镜下观察细胞形态,并确定是否染菌,如有染菌,请立即拍照,并将细胞丢弃;
3.    将培养瓶置于37°C,5% CO2的无菌培养箱中培养4-6小时;
4.    倒掉多余的培养基,留正常体积的培养基;
5.    重新将培养瓶置于37°C,5% CO2的无菌培养箱中培养过夜;
6.    第二天传代。
收到冻存细胞的处理方法:
1.    37°C水浴预热培养基;
2.    从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(注意:解冻后不要继续暖细胞)
3.    在超净台中加入5ml培养基重悬细胞,1000rpm离心5分钟;
4.    弃上清,加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中,轻轻混匀;
5.    置于37°C,5% CO2的无菌培养箱中培养(注意:培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧);
6.    第二天,用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。

细胞传代:
1.    当细胞融合度达到90%以上时,给细胞传代;
2.    37°C水浴预热培养基;
3.    在超净台中,弃培养基,加入2-5ml PBS清洗细胞后,再加入1ml胰酶消化细胞;
4.    显微镜下观察到细胞变圆,有细胞开始脱离瓶壁时,加入5ml培养液终止消化;
5.    用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞,并轻轻吹打将细胞吹散;
6.    将细胞移入离心管中,1000rpm离心5分钟;
7.    弃上清,加入15-20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中(确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间),细胞密度在1×104个/cm2(2.5×10Cells/T25瓶),混匀细胞悬液,确保细胞均匀分布;
8.    将培养瓶置于37°C,5% CO2的无菌培养箱中培养。

细胞冻存:
1.    37°C水浴预热培养基;
2.    消化细胞后给细胞计数;
1)   洗净晾干血小板计数板和盖玻片,将盖玻片完全覆盖计数区;
2)   充分混匀细胞,取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合,移液器吹吸混合均匀,用移液器取20ul混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞,以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳;
3)   显微镜下,计数四个计数区的总细胞数目,无活性细胞染成蓝色,活细胞不被染色;
4)   细胞密度=细胞总数/4×10000×2;这里10000是不变的,因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm,即10-4cm3计数池内,1cm3=1ml,将四个计数区的细胞数目除以4取平均数,乘以2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。
5)   细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%
注:细胞密度高时,可调整细胞悬液和台盼蓝的比例,计数时乘以相应的稀释倍数即可。
3.    当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时,可以冻存细胞。
4.    在超净台中将要冻存的细胞移入离心管,1000rpm离心5分钟;
5.    弃上清,用90%培养液+10%DMSO的混合液重悬细胞,并调整细胞密度为1-3×106/ml;
6.    将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管);
将装有细胞的冻存管置于-20°C放1-2小时后,-80°C过夜后转移到液氮中保存。

细胞检测结果分析:
利用流式细胞仪对分选的原代HUVECs进行鉴定。vWF和CD31的表达呈阳性,而a-SMA以及CD45的表达呈阴性。

以及采用CD31抗体的免疫荧光检测结果显示CD31蛋白荧光阳性。
图片如下:

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