人脐静脉内皮细胞

一、产品详情：
1.    产品名称：人脐静脉内皮细胞，Human Umbilical Vein Endothelial Cells
2.    组织来源：人脐静脉组织
3.    细胞形态：细胞贴壁生长，呈现铺路石状镶嵌排列，细胞为扁平多角形，辩解清除，包浆丰富
4.    发货形式：新鲜原代细胞或冻存原代细胞
5.    细胞简介：本公司生产的人脐静脉内皮细胞采用胶原酶消化制备而来，细胞总量约为5×10⁵个/瓶，细胞纯度可达90%以上，且不含HIV-1，HBV，HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
6.    注意事项：该细胞只可用于科研。

二、产品手册
产品介绍：
      人脐静脉内皮细胞分离自脐带静脉，一般用于生理学和药理学研究，例如大分子转运、血液凝固、血管发生和纤维蛋白溶解等等。

质量控制：
       本产品经过了真菌/细菌、支原体、内毒素检测。
       本产品还经过细胞复苏活力检测，细胞周期检测，分化潜能鉴定。
       本产品经过光镜检测形态，经Western blot检测蛋白标记物的表达鉴定。
       该产品仅提供给进一步科研使用，不可应用于临床治疗等其他方面。

产品特性：
       在进行血管内皮细胞实验时，通常选用的细胞模型为人脐静脉内皮细胞，而不是直接采用静脉血管内皮细胞或者动脉血管内皮细胞。原因是脐静脉内皮细胞具有干细胞的潜能，理论上可以传代50-60次，且具有血管生成、迁移等特点。

细胞相关操作
        细胞操作都需严格按照无菌操作进行。
收到复苏好的贴壁细胞的处理方法：
1.    先从外包装盒中拿出细胞瓶，在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜；
2.    在显微镜下观察细胞形态，并确定是否染菌，如有染菌，请立即拍照，并将细胞丢弃；
3.    将培养瓶置于37°C，5% CO₂的无菌培养箱中培养4-6小时；
4.    倒掉多余的培养基，留正常体积的培养基；
5.    重新将培养瓶置于37°C，5% CO₂的无菌培养箱中培养过夜；
6.    第二天传代。
收到冻存细胞的处理方法：
1.    37°C水浴预热培养基；
2.    从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（注意：解冻后不要继续暖细胞）
3.    在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5分钟；
4.    弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻混匀；
5.    置于37°C，5% CO₂的无菌培养箱中培养（注意：培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧）；
6.    第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。

细胞传代：
1.    当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；
2.    37°C水浴预热培养基；
3.    在超净台中，弃培养基，加入2-5ml PBS清洗细胞后，再加入1ml胰酶消化细胞；
4.    显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养液终止消化；
5.    用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；
6.    将细胞移入离心管中，1000rpm离心5分钟；
7.    弃上清，加入15-20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度在1×10⁴个/cm²（2.5×10⁵ Cells/T25瓶），混匀细胞悬液，确保细胞均匀分布；
8.    将培养瓶置于37°C，5% CO₂的无菌培养箱中培养。

细胞冻存：
1.    37°C水浴预热培养基；
2.    消化细胞后给细胞计数；
1)   洗净晾干血小板计数板和盖玻片，将盖玻片完全覆盖计数区；
2)   充分混匀细胞，取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合，移液器吹吸混合均匀，用移液器取20ul混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞，以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳；
3)   显微镜下，计数四个计数区的总细胞数目，无活性细胞染成蓝色，活细胞不被染色；
4)   细胞密度=细胞总数/4×10000×2；这里10000是不变的，因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm，即10^-4cm³计数池内，1cm³=1ml，将四个计数区的细胞数目除以4取平均数，乘以2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。
5)   细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%
注：细胞密度高时，可调整细胞悬液和台盼蓝的比例，计数时乘以相应的稀释倍数即可。
3.    当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞。
4.    在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm离心5分钟；
5.    弃上清，用90%培养液+10%DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为1-3×10⁶/ml；
6.    将细胞悬液分装到冻存管中（1-1.5ml/管）；
将装有细胞的冻存管置于-20°C放1-2小时后，-80°C过夜后转移到液氮中保存。

细胞检测结果分析：
利用流式细胞仪对分选的原代HUVECs进行鉴定。vWF和CD31的表达呈阳性，而a-SMA以及CD45的表达呈阴性。

以及采用CD31抗体的免疫荧光检测结果显示CD31蛋白荧光阳性。
图片如下：