BCA 蛋白定量检测试剂盒

BCA蛋白定量检测试剂盒
（BCA Protein Assay Kit）

产品信息：

运输与保存方法：
    室温运输。试剂盒室温保存即可，长期不用的蛋白标准品（BSA）也可放到4°C保存，有效期12个月。
产品描述：
    BCA法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度定量测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu²⁺还原成Cu⁺，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。与Lowery法相比，BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的操作简便、灵敏度高、快速和稳定性佳。与Bradford法相比具有受去垢剂的影响较小等显著优势。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。
产品特点：
1)       灵敏度高，检测浓度下限达到5 μg/ml。
2)       速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。
3)       线性范围广，25-2000 μg/ml浓度范围内有较好的线性范围。
4)       不受大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80等。
操作方法：

一、配制标准品和工作液

1、配制蛋白标准品（BSA）品系
   注：标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液进行稀释，这样可以最大程度降低溶液中各种成分的干扰。但是也可以用0.9%的NaCl或者1×PBS溶液进行稀释。

BSA标准品的配制可参考表一：
表一、BSA标准品系配制（线性范围25-2000μg/ml）

注：微孔板检测每管需要100 μl标准品，如果用比色皿检测，按3个重复计算，每个浓度至少配制300 μl。
如果样品的浓度比较低，则可以按照以下加强试管的稀释方案（线性范围为5-250μg/ml）进行标准曲线的制作。

表二、BSA标准品系配制（线性范围5-250μg/ml）

 2、配制BCA工作液

            1）计算所需要的总BCA工作液体积
                         总BCA工作液体积=（标准品+待测样品）×重复数×每个样品所需要的BCA工作液
   注：微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液，比色皿检测时每个样品加2.0ml BCA工作液。

            2）配制BCA工作液：50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B（A:B=50:1）,充分混匀。
   注：BCA试剂B加入后，溶液迅速混浊，通过混匀后立即变澄清。BCA工作液最好现用现配，检测前4小时之内配制后装入密封容器内存放，试剂比较稳定。

二、检测方法

1、微孔板检测方法
          1）各取10 μl标准品和待测样品加入到微孔板中。
    注：样品与工作液的比例可根据待测样品的量而定，若样品有限，可适量减少标准品和待检测样品的用量，该试剂盒的检测范围为25-2000 μg/ml。
          2）每孔加入200 μl BCA工作液，振荡充分混匀后，避光置于37°C，孵育30min。
          3）冷却至室温，在酶标仪上的540~595nm波长范围内检测吸光度，其中562nm波长的吸光度为最佳。
    注：由于酶标板的光径较短，需要更好的样品与工作液的比率来获得较好的检测灵敏度；若检测波长大于562nm，建议延长孵育时间，最长至2小时；
          4) 根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-最终的OD_562nm读数， Y-蛋白浓度μg/ml）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

2、比色皿检测方法
          1）各取100 μl标准品和待测样品加入到反应管中。
          2）每孔加入2.0 ml BCA工作液，振荡充分混匀后，避光置于37°C，孵育30min。
注：由于酶标板的光径较短，需要更好的样品与工作液的比率来获得较好的检测灵敏度；若检测波长大于562nm，建议延长孵育时间，最长至2小时；
          3）冷却至室温，在酶标仪上的540~595nm波长范围内检测吸光度，其中562nm波长的吸光度为最佳。
注：由于酶标板的光径较短，需要更好的样品与工作液的比率来获得较好的检测灵敏度；若检测波长大于562nm，建议延长孵育时间，最长至2小时；
          4) 根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-最终的OD_562nm读数， Y-蛋白浓度μg/ml）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。