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BCA 蛋白定量检测试剂盒

BCA 蛋白定量检测试剂盒

BCA蛋白定量检测试剂盒
BCA Protein Assay Kit)


产品信息:

        产品货号
产品组分

B00101-100 (500T)

B00101-250 (1250T)

B00101-500 (2500T)

BCA Solution A

100ml

250ml

500ml

BCA Solution B

3ml

7.5ml

15ml

蛋白标准品(BSA)

5×1ml (2mg/ml)

5×1ml (2mg/ml)

5×2ml (2mg/ml)

 

运输与保存方法:
    室温运输。试剂盒室温保存即可,长期不用的蛋白标准品(BSA)也可放到4°C保存,有效期12个月。
产品描述:
    BCA法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度定量测定方法。基于双缩脲反应,即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+,产生一种紫蓝色复合物,在562nm处有高的吸光值,该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。与Lowery法相比,BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的操作简便、灵敏度高、快速和稳定性佳。与Bradford法相比具有受去垢剂的影响较小等显著优势。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。
产品特点:
1)       灵敏度高,检测浓度下限达到5 μg/ml。
2)       速度快,比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。
3)       线性范围广,25-2000 μg/ml浓度范围内有较好的线性范围。
4)       不受大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20,60,80等。
操作方法:

一、配制标准品和工作液

1、配制蛋白标准品(BSA)品系
   注:标准品稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液进行稀释,这样可以最大程度降低溶液中各种成分的干扰。但是也可以用0.9%的NaCl或者1×PBS溶液进行稀释。

BSA标准品的配制可参考表一:
表一、BSA标准品系配制(线性范围25-2000μg/ml)

管号

稀释液体积(μl

2mg/ml BSA体积(μl

BSA终浓度(μg/ml

A

0

100

2000

B

25

75

1500

C

50

50

1000

D

125

75

750

E

150

50

500

F

350

50

250

G

375

25

125

H

395

5

25

I

400

0

0=Blank

 

注:微孔板检测每管需要100 μl标准品,如果用比色皿检测,按3个重复计算,每个浓度至少配制300 μl。
如果样品的浓度比较低,则可以按照以下加强试管的稀释方案(线性范围为5-250μg/ml)进行标准曲线的制作。

表二、BSA标准品系配制(线性范围5-250μg/ml)

管号

稀释液体积(μl

BSA来源及体积(μl

BSA终浓度(μg/ml

A

350

50的原液

250

B

200

200A管稀释液

125

C

225

150B管稀释液

50

D

150

150C管稀释液

25

E

300

75D管稀释液

5

F

200

0

0

 

 2、配制BCA工作液

            1)计算所需要的总BCA工作液体积
                         总BCA工作液体积=(标准品+待测样品)×重复数×每个样品所需要的BCA工作液
   注:微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液,比色皿检测时每个样品加2.0ml BCA工作液。

            2)配制BCA工作液:50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B(A:B=50:1),充分混匀。
   注:BCA试剂B加入后,溶液迅速混浊,通过混匀后立即变澄清。BCA工作液最好现用现配,检测前4小时之内配制后装入密封容器内存放,试剂比较稳定。

二、检测方法

1、微孔板检测方法
          1)各取10 μl标准品和待测样品加入到微孔板中。
    注:样品与工作液的比例可根据待测样品的量而定,若样品有限,可适量减少标准品和待检测样品的用量,该试剂盒的检测范围为25-2000 μg/ml。
          2)每孔加入200 μl BCA工作液,振荡充分混匀后,避光置于37°C,孵育30min。
          3)冷却至室温,在酶标仪上的540~595nm波长范围内检测吸光度,其中562nm波长的吸光度为最佳。
    注:由于酶标板的光径较短,需要更好的样品与工作液的比率来获得较好的检测灵敏度;若检测波长大于562nm,建议延长孵育时间,最长至2小时;
          4) 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-最终的OD562nm读数, Y-蛋白浓度μg/ml)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

2、比色皿检测方法
          1)各取100 μl标准品和待测样品加入到反应管中。
          2)每孔加入2.0 ml BCA工作液,振荡充分混匀后,避光置于37°C,孵育30min。
注:由于酶标板的光径较短,需要更好的样品与工作液的比率来获得较好的检测灵敏度;若检测波长大于562nm,建议延长孵育时间,最长至2小时;
          3)冷却至室温,在酶标仪上的540~595nm波长范围内检测吸光度,其中562nm波长的吸光度为最佳。
注:由于酶标板的光径较短,需要更好的样品与工作液的比率来获得较好的检测灵敏度;若检测波长大于562nm,建议延长孵育时间,最长至2小时;
          4) 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-最终的OD562nm读数, Y-蛋白浓度μg/ml)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

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