Western blot ECL 化学发光检测试剂盒（超敏）

Western blot ECL化学发光检测试剂盒使用说明书

产品简介
       Western blot ECL化学发光检测试剂盒可用于检测辣根过氧化物酶（HRP）标记的蛋白或核酸底物。 本产品采用全新的发光增强剂，并对各种成分进行优化，使之具有以下几个方面的优点：1、灵敏度高， 微弱的信号也能检测，所以允许使用更高的抗体稀释倍数，（1: 4000-1: 10000），极其节省抗体； 2、 有效降低发光试剂造成的非特异发光和背景发光，从 而避免发光试剂造成"非特异条带”或"背景条带”； 3、 不破坏膜上蛋白，可在曝光后，经洗涤，对多种蛋白进行杂交； 4、发光更加稳定可靠，从而避免“发光淬灭"以及人为干扰。

试剂盒组分

实验步骤
1、     按常规Western blot操作，电泳、转膜、一抗 孵育、二抗孵育后，进行最后一次洗涤时，根据膜的大小，新鲜配制发光工作液。将溶液A、溶液B按1:1 比率混合，制成发光工作液（每1cm²膜需要0.125ml 发光工作液）；
2、     用镊子取出膜，并搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。膜的蛋白面朝上，将配制的发光检测液均匀覆盖到蛋白膜上，室温孵育1分钟左右；
3、     用镊子将膜夹起5-10秒，并将膜的下缘与滤 纸轻轻接触以除去膜上多余的发光液，迅速将膜完全 包裹于洁净保鲜膜内，去除气泡和褶皱，蛋白面朝上 固定于X片暗盒；
4、     在暗室中取一张X片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光30秒至1分钟。立即显影定影，根据其曝光强度，缩短或延长下一张X片的曝光时间（对微弱信号，曝光时间可延长至数小时）；
5、     对同一张膜进行多次蛋白杂交：用PBST或 TBST洗涤掉发光液（10minx3次），然后从开始一 抗杂交即可。
注意事项
1、     避光条件下，配制好的化学发光工作液在室温下可稳定8小时。但不宜暴露于强光下时间过久，请 避光保存。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用；
2、     长时间曝光或蛋白质过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊；
3、     为了得到最佳的曝光效果，优化一抗、二抗的稀释比例；
4、     整个免疫印迹实验过程请确保印迹膜始终处于湿润状态，避免干燥；
5、     避免使用NaN₃回收HRP偶联的抗体，因为NaN₃能抑制HRP的活性；
6、     NaN₃能抑制HRP活性，回收二抗时应避免使用NaN₃,如必需使用勿超过0.01%;
7、     在封闭缓冲液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20 （终浓度为0.05% ），以减少非特异性 结合；
8、     某些市售的保鲜膜会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。