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Western blot ECL 化学发光检测试剂盒(超敏)

Western blot ECL 化学发光检测试剂盒(超敏)

Western blot ECL化学发光检测试剂盒使用说明书

产品简介
       Western blot ECL化学发光检测试剂盒可用于检测辣根过氧化物酶(HRP)标记的蛋白或核酸底物。 本产品采用全新的发光增强剂,并对各种成分进行优化,使之具有以下几个方面的优点:1、灵敏度高, 微弱的信号也能检测,所以允许使用更高的抗体稀释倍数,(1: 4000-1: 10000),极其节省抗体; 2、 有效降低发光试剂造成的非特异发光和背景发光,从 而避免发光试剂造成"非特异条带”或"背景条带”; 3、 不破坏膜上蛋白,可在曝光后,经洗涤,对多种蛋白进行杂交; 4、发光更加稳定可靠,从而避免“发光淬灭"以及人为干扰。

试剂盒组分

产品编号

试剂

浓度

试剂量

保存条件

B00701-125
B00701-250
B00701-500

溶液A

2x

100ml/250ml/500ml

4°C密封避光 保存有效期一 年以上。

溶液B

2x

100ml/250ml/500ml

 

实验步骤
1、     按常规Western blot操作,电泳、转膜、一抗 孵育、二抗孵育后,进行最后一次洗涤时,根据膜的大小,新鲜配制发光工作液。将溶液A、溶液B按1:1 比率混合,制成发光工作液(每1cm2膜需要0.125ml 发光工作液);
2、     用镊子取出膜,并搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。膜的蛋白面朝上,将配制的发光检测液均匀覆盖到蛋白膜上,室温孵育1分钟左右;
3、     用镊子将膜夹起5-10秒,并将膜的下缘与滤 纸轻轻接触以除去膜上多余的发光液,迅速将膜完全 包裹于洁净保鲜膜内,去除气泡和褶皱,蛋白面朝上 固定于X片暗盒;
4、     在暗室中取一张X片置于包裹的膜上,合上暗盒,曝光30秒至1分钟。立即显影定影,根据其曝光强度,缩短或延长下一张X片的曝光时间(对微弱信号,曝光时间可延长至数小时);
5、     对同一张膜进行多次蛋白杂交:用PBST或 TBST洗涤掉发光液(10minx3次),然后从开始一 抗杂交即可。
注意事项
1、     避光条件下,配制好的化学发光工作液在室温下可稳定8小时。但不宜暴露于强光下时间过久,请 避光保存。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用;
2、     长时间曝光或蛋白质过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊;
3、     为了得到最佳的曝光效果,优化一抗、二抗的稀释比例;
4、     整个免疫印迹实验过程请确保印迹膜始终处于湿润状态,避免干燥;
5、     避免使用NaN3回收HRP偶联的抗体,因为NaN3能抑制HRP的活性;
6、     NaN3能抑制HRP活性,回收二抗时应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%;
7、     在封闭缓冲液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20 (终浓度为0.05% ),以减少非特异性 结合;
8、     某些市售的保鲜膜会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。


 

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